PCR Yöntemi Nedir

PCR Yöntemi Nedir

PCR yöntemi ilk olarak Cetus genetik araştırmalar departmanında çalışan Karry Mullis tarafından 1985 yılında keşfedilmiştir. Patenti alınan bu yöntem Karry Mullis’e Nobel Ödülü kazandırmıştır.

PCR yöntemi, taq polimeraz enziminin bulunmasıyla geliştirilmiş bir yöntemdir. Yani temelleri bu enzimin bulunmasına dayanmaktadır. PCR kelime anlamıyla Polymerase Chain Reaction kelimelerinin baş harfleriyle kısaltılmasıdır. Türkçe anlamıyla Polimeraz Zincirleme Tepkimesi olarak çevirilebilir.

PCR yöntemi DNA içerisindeki sarmal dizilerin iki segmentinin özgün bir alana enzimatik yönden çoğaltılarak tepkimelere neden olmasıdır. PCR yönteminde uygulama şekli genel bağlamda oldukça basittir. Bu yöntem insanların DNA sırrını çözüp kontrol edebileceği bir dünyanın temelleri olarak görülmektedir.Tüp içerisinde bulunan nükleik asit segmentlerinin bir çeşit in vitro klonlama olarak da değerlendirilen 94 ile 98 derece arasında gerçekleştirilen denatürasyon, 37 ile 65 derce arasında gerçekleştirilen tavlama ve 72 derecede gerçekleştirilen yeniden sarmallaştırıp uzama işleminde meydana gelir. Bu işlemin bir döngü halinde devam etmesi esasına dayanır. Başlangıçta kullanılan DNA moleküllerinin sayısına bağlı olarak döngü sayısı belirlenir. 1 ile 100 kopya DNA molekülü ile PCR yöntemine başlanmış ise 30 ile 45 döngü, 1000 ile 100000 arasında DNA molekülü ile PCR yöntemine başlanmışsa 20 ile 30 döngü yeterlidir. Her bir döngü sonunda DNA molekül segmenti sayısı 2 katına çıkar. Döngünün tamamlanmasına müteakip 2n segment yeniden tekrarlanan döngüde kullanılır.

PCR yönteminde kullanılan DNA molekülleri saf olmak zorunda değildir. Kaba hücre özütleri kullanılabilir. Bunlar kan, sperm ya da total DNA Preparatıdır. Bu segmentlerin senteziyle yapılan analiz ya da işlemler yüzde 99 gibi büyük bir oranda başarılı sonuç verir.

Taq Polimeraz enzimi ilk defa Yellowstone milli parkı kaplıcalarında izole edilmiştir. Termofilik bir bakteride izole edilen bu enzim çok yüksek sıcaklıklara bile dayanabilecek özellikteki bir enzimdir.

PCR Yönteminin Kullanım Alanları

• Gen klonlama,
• Bulaşıcı hastalık teşhisi,
• Genetik hastalık teşhisi,
• Genetik parmak izlerinin tanımlanması,
• Babalık testi,
• DNA hesaplaması gibi alanlarda kullanılır.

PCR yöntemi ayrıca bitki ve hayvanların genetik akrabalıklarının belirlenmesinde zooloji bilimi içinde önemli bir yöntemdir.

Konuya Dair

• PCR ve PCR Cihazı Nedir